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    【收藏】關于"大腸菌群、糞大腸、大腸埃希氏菌檢驗知識",都在這里啦!

    放大字體  縮小字體 發布日期:2022-06-13  瀏覽次數:42
    核心提示:1、大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌檢驗方法(1)大腸菌群(coliforms)一群在36℃培養48h可發酵乳糖產酸產氣、需氧或兼性厭
     1、大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌檢驗方法

     

    (1)大腸菌群(coliforms)

    一群在36℃培養48h可發酵乳糖產酸產氣、需氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。

     

    該菌主要來源自人畜糞便,作為糞便污染指標評價食品的衛生狀況,推斷食品中腸道致病菌污染的可能。

     

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    (2)糞大腸菌群(Fecal colifoms)

    也稱耐熱大腸菌群。指大腸菌群中能在44.5℃生長、發酵乳糖產生氣體的一群細菌。

     

    與大腸菌群一樣,并非細菌學分類命名,而是衛生細菌領域的用語,它不代表某-一個或某一屬細菌,而指的是具有某些特性的-組與糞便污染有關的細菌,這些細菌在生化及血清學方面并非完全一致。

     

    食品衛生學意義:作為糞便污染食品的指標菌,MPN值愈低則說明食品受糞便污染程度及對人體健康危害程度愈低

     

    作為腸道致病菌污染食品的指針,大腸菌群數量越多則腸道致病菌存在的可能性就越高,但兩者之間并不總是呈平行關系。

     

    (3)大腸埃希氏菌(Escherichia coli)

    分類學概念:腸桿菌科、埃希氏菌屬。是人和溫血動物腸道內普遍存在的細菌,是糞便中的主要菌種。一般生活在人大腸中并不致病,但它侵入人體一些部位時,可引起感染。

    主要有:

    ■O抗原(菌體抗原,150個)

    ■K抗原(莢膜抗原,90個)

    ■H抗原( 鞭毛抗原,50個)

     

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    (4)致瀉性大腸埃希氏菌

    能侵入腸粘膜上皮細胞,引起食物中毒的大腸埃希氏菌。產毒性大腸埃希氏菌(ETEC)-腸胃炎、旅行性腹瀉。

     

    ■致病性大腸埃希氏菌(EPEC)-嬰兒腹瀉;

    ■腸出血性大腸埃希氏菌(EHEC)--出血性結腸炎;(O157∶H7;O104∶ H4;O111;O126等)

    ■侵襲性大腸埃希氏菌(EIEC)—桿菌性痢疾;

    ■粘附性大腸埃希氏菌(EAEC)—急慢性腹瀉。

     

    2、大腸菌群、糞大腸菌群、大腸埃希氏菌的關系

     

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    3、相關檢驗方法標準

    ■GB4789.3-2016食品安全國家標準食品微生物學檢驗大腸菌群計數

    ■GB 4789.38-2012食品安全國家標準食品微生物學檢驗大腸埃希氏菌計數

    ■GB 4789.39-2013食品安全國家標準食品微生物學檢驗糞大腸菌群計數

    ■GB4789.6-2016食品安全國家標準食品微生物學檢驗致瀉大腸埃希氏菌檢驗

    ■GB4789.36-2016食品安全國家標準食品微生物學檢驗大腸埃希氏菌O157:H7/NM檢驗。

     

    4、大腸菌群和糞大腸菌群的檢測流程圖

     

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    5、大腸菌群計數檢驗的操作

    MPN法:

     

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    6、結果報告

     

    根據經確證后的對應濃度陽性管數查MPN表(MPN:最可能數,基于泊松分布的一種間接計數方法)

     

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    7、VRBA平板計數法

     

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    8、結果報告

    經最后證實大腸菌群陽性的BGLB試管比例乘以VRBA菌落數再乘以稀釋倍數,即為每克(毫升)樣品中大腸菌群數。

    如:稀釋倍數10-3,吸取樣品稀釋液1ml平板典型或可疑菌落數100挑取10個典型或可疑菌落接種BGLB→陽性6管

     

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    9、大腸埃希氏菌MPN計數法檢驗程序

     

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    10、大腸埃希氏菌在EMB上的菌落形態

    具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落。

     

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    11、靛基質試驗(呵噪試驗)(I)

    ■原理:某些細菌能分解蛋白質生成呵器,呵跺與對二甲基氨基苯醛結合,形成玫瑰呵噪紅色化合物。

    ■培養基:色氨酸肉湯。

     

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    12、甲基紅反應(MR)

    腸桿菌科各菌屬都能發酵葡萄糖,在分解葡萄糖過程中產生丙酮酸,進一步分解中,由于糖代謝的途徑不同,可產生乳酸,琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產物,可使培養基PH值下降至pH4.5以下,使甲基紅指示劑變紅。

     

    ■培養基:MR-VP培養基。

     

    13、V-P試驗(VP)

    某些細菌在葡萄糖蛋白陳水培養基中能分解葡萄糖產生丙酮酸,丙酮酸縮合,脫羧成乙酰甲基甲醇,后者在強堿環境下,被空氣中氧氧化為二乙酰,二乙酰與蛋白陳中的肌基生成紅色化合物,稱V一P(+)反應。

     

    36℃±1℃培養48h,加數滴甲基紅溶液"

     

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    14、檸檬酸鹽利用試驗

    有的細菌如產氣桿菌,能利用檸檬酸鈉為碳源,因此能在檸檬酸鹽培養基上生長,并分解檸檬酸鹽后產生碳酸鹽,使培養基變為堿性。此時培養基中的溴麝香草酚藍指示劑由綠色變為深藍色。不能利用檸檬酸鹽為碳源的細菌,在該培養基上不生長,培養基不變色。

     

    15、大腸埃希氏菌與非大腸埃希氏菌的生化鑒別

     

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    ■大腸埃希氏菌為革蘭氏陰性無芽胞桿菌,發酵乳糖、產酸、產氣,IMViC 生化試驗為十十——或一十——。只要有1個菌落鑒定為大腸埃希氏菌,其所代表的LST肉湯管即為大腸埃希氏菌陽性。依據LST肉湯陽性管數查 MPN 表(見附錄B),報告每 g (mL)樣品中大腸埃希氏菌 MPN 值。

     

    16、大腸埃希氏菌平板計數法(第二法)

     

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    17、大腸埃希氏菌平板計數

    (1)選取2個~3個適宜的連續稀釋度的樣品勻液,每個稀釋度接種2個無菌平皿,每皿1 mL。同時取1 mL稀釋液加入無菌平皿做空白對照。

     

    (2)將10 mL~15 mL冷至45℃±0.5℃的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)傾注于每個平皿中。小心旋轉平皿,將培養基與樣品勻液充分混勻。待瓊脂凝固后,再加3 mL~4 mLVRBA-MUG覆蓋平板表層。凝固后翻轉平板,36 ℃±1℃培養18 h~24 h。

     

    (3)選擇菌落數在10 CFU~100 CFU之間的平板,暗室中360nm~366 nm波長紫外燈照射下,計數平板上發淺藍色熒光的菌落。

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    (4)檢驗時用已知MUG陽性菌株(如大腸埃希氏菌ATCC 25922)和產氣腸桿菌(如ATCC 13048)做陽性和陰性對照。

     

    18、大腸埃希氏菌平板計數的報告平板計數的報告

     

    兩個平板上發熒光菌落數的平均數乘以稀釋倍數,報告每g(mL)樣品中大腸埃希氏菌數,以CFU/g(mL)表示。若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1乘以最低稀釋倍數報告。

    編輯:songjiajie2010

     
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    關鍵詞: 檢驗
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