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    凝結芽孢桿菌的測定方法

    放大字體  縮小字體 發布日期:2022-06-13  瀏覽次數:5
    核心提示:1、蛋白胨稀釋液的制備: 將1g蛋白胨(細菌蛋白胨除外)溶于1000mL去離子水中,用鹽酸調節pH至7.0,滅菌溫度為121℃。時長15分鐘。2
     1、蛋白胨稀釋液的制備:

      將1g蛋白胨(細菌蛋白胨除外)溶于1000mL去離子水中,用鹽酸調節pH至7.0,滅菌溫度為121℃。時長15分鐘。

     

    2、微量元素溶液制備:

      微量元素水溶液營養成分的組成如表1所示

     

    表1.微量元素溶液組成

    微量元素

    濃度

    氯化鈉

    10mg/mL

    七水硫酸亞鐵

    18mg/mL

    一水硫酸錳

    16mg/mL

    七水硫酸鋅

    1.6mg/mL

    五水硫酸銅

    1.6mg/mL

    七水硫酸鈷

    1.6mg/mL

     

    3、液化GYE瓊脂培養基的制備:

      營養成分的組成如表2所示

     

    表2.液化GYE瓊脂培養基營養成分的組成 

    試劑

    數量

    酵母提取物粉末

    5.0g

    蛋白胨

    5.0g

    葡萄糖 

    5.0g

    磷酸氫二鉀(K2HP04)

    0. 5g

    磷酸二氫鉀(KH2P04)

    0. 5g

    硫酸鎂

    0.3g

    微量元素

    1.0mL

     

    1000.0mL

      使用乳酸溶液調節上述營養成分混合液pH到6.3。將混合液轉移到大錐形瓶

    中,向錐形瓶中加入15.0g瓊脂。使用鋁箔包裹錐形瓶,將其放置于加熱板上進行加熱,并攪摔,直到瓊脂完全溶解。隨后在高壓滅菌鍋中在121℃下進行至少15分鐘滅菌。待高壓滅菌鍋可以安全打開時,將錐形瓶放置于50℃的水浴中。

     

    4、樣品準備

      4.1 食品取樣

      稱取25g樣品,置于無菌均質袋中,加225mL滅菌蛋白胨水,拍擊式均質器均質至完全溶解于蛋白胨水,混勻。

      注:若樣品不能完全溶于蛋白胨水,需要將蛋白胨水預熱至50再加入樣品,或加入樣品后將混合懸浮液置于50℃預熱5min,直至樣品完全溶解。

     

      4.2 檢查混合懸浮液pH值。若pH小于7.0,用氫氧化鈉(5N)溶液調節pH至8.5±0.2;若pH大于8.7,用鹽酸溶液(5N)調節pH至8.5±0.2。

     

      4.3 樣品移取20-30mL均質懸浮液于50ml離心管中于75℃水浴30min,立即冷卻至45℃以下,然后移液。

     

      4.4 移取1.0ml該液于9.0mL滅菌蛋白胨水的試管中,渦旋徹底混勻(10-2稀釋管即得)。

     

      4.5 根據要求重復操作。所做稀釋度及平板培養所用稀釋度應隨預期孢子數變化而變化。

      注1:將每個稀釋度溶液混勻,然后移液;

      注2:步驟4.3:將離心管置于水浴后立即開啟計時器。

     

    5、平板培養

      5.1 液化GYE瓊脂培養基,然后置于水浴中冷卻至50℃以下(該培養基容易凝固,要置于50℃左右的水浴鍋內) ;每個稀釋度準備兩個無菌培養皿。分別從最后兩個稀釋管溶液中加1.0mL于相應編號的培養皿中,然后將15至20mL的熔融培養基倒至各個培養皿,徹底混勻。待固化時,將平板翻轉,40℃+2℃培養48小時,同時準備一個只包含瓊脂培養基及一個只含有1.0mL蛋白胨稀釋液和瓊脂培養基作為陰性對照。

     

    6、平板計數

      菌落數在30至300之間的平板計數最為理想。平板計數只記錄滿足以下條件的菌落:瓊脂表面的菌落需要直徑為1mm到5mm;白色到奶色,凸面,具有完整的邊緣和光滑的表面。嵌在瓊脂培養基中的菌落需要直徑為0. 5mm-1mm在瓊脂中具有奶色的點狀體。

     

      6.1 若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內,計算兩個平板菌落數的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數,作為每g(mL)樣品中菌落總數結果。

     

      6.2 若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時,按公式(1)計算:

      N= ∑C/ (n1+0.1n2)d........................ (1)

      式中:

      N-樣品中菌落數:

      ∑C - 平板(含適宜范圍菌落數的平板)菌落數之和:

      n1 - 第一稀釋度(低稀釋倍數)平板個數;

      n2 - 第二稀釋度(高稀釋倍數)平板個數;

      d - 稀釋因子(第一稀釋度)。

    編輯:songjiajie2010

     
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