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    脂溶性維生素的測定

    放大字體  縮小字體 發布日期:2010-08-28  瀏覽次數:6388
    核心提示:一、維生素A目前維生素A都是合成的,來源:(1)從動物肝臟中得到;(2)從維生素前體而得到(維生素前體:主要指類胡蘿卜素,

    一、維生素A

    目前維生素A都是合成的,來源:(1)從動物肝臟中得到;(2)從維生素前體而得到(維生素前體:主要指類胡蘿卜素,主要是β-胡蘿卜素)

    維生素A的測定常用的方法有三氯化銻比色法、紫外分光光度法、熒光分析法、液相色譜法。

    對于三氯化銻比色法適用于樣品中含VA高的樣品,方法簡便、快速、結果準確,但是對維生素A含量低的樣品,如每克樣品中含510μg維生素A時,這時樣品由于受其脂溶性物質的干擾,不應用比色法測定。

    對于紫外分光光度法不必加顯色劑顯色,可直接測定維生素A的含量,對樣品中含VA低的也可以測出可信結果,操作簡便、快速。

    1、維生素A的性質

    因有許多不飽和鏈,故見光易分解;

    在缺氧情況下,對熱較穩定,對光特別敏感。如測強化奶粉時,速度要快,一般要求測定時間長短,因為時間長,見光時間長,見光分解,故測出的比出廠的含量要少;

    對堿穩定;

    2、測定步驟

    樣品用有機溶劑萃取脂類

    樣品可以根據脂肪的測定處理脂肪,即索氏抽提法,采用乙醚作提取劑,也可用熱苯回流方法提取脂類。如果樣品中含蛋白質和淀粉多的情況下可采用乙醚提取法。

    ⑵脂類的皂化

    脂類有維生素和脂肪這兩部分通過皂化(50%KOH、無水C2H3OH、熱回流)把它們分開,得到一部分皂化物和一部分不皂化物。

    皂化條件:

    1C2H3OH︰脂類 = 81

    2KOH = 脂量×皂化價(mg)×2.5

    3)皂化溫度與時間:70℃、30分鐘

    在皂化時可以加入抗氧劑連苯二酚和對苯二酚,防止氧化。

    提取:不皂化物和皂化物經水、苯、乙醚萃取可得到不皂化物。

    柱層析分離干擾物質

    采用柱層析分離干擾物質,如果柱層析把β-胡蘿卜素也洗脫下來,那么這時維生素A與β-胡蘿卜素就是一個混合物,還要將它們分離開。如果樣品中只有維生素A而不含β-胡蘿卜素時,這時可直接定容。

    維生素A與β-胡蘿卜素分離:

    吸附劑:  8分中性Al2O32分堿性Al2O3混合,裝柱

    分離方法:a. 2%丙酮石油醚洗β-胡蘿卜素;

                b. 用乙醚洗VA

    3、測定方法

    SbCl3比色法

    維生素ACHCl3 SbCl3CHCl3→形成蘭色物質→在620nm有最大吸光峰

    這種蘭色物質不穩定,很快褪色或變成其它物質,所以在分析時最好在暗室中進行,并且做標準曲線。

    計算:每百克樣品含VA的量= C×(V1/V2)×(100/W

    C :從標準曲線上查得VA的量

    V1 CHCl3定容的量

    V2 測定所取樣液體積

    紫外分光光度法

    a. 原理:

    VA為脂溶性的,測定VA時必須先將樣品中的脂肪抽提出來進行皂化,萃取不皂化部分,在經柱

    層析除去雜質等干擾物質,在紫外328nm下測定,求出含量。

    b. 方法

    1 提取及皂化

    稱樣10.00g 于燒杯中 40ml水攪勻 250ml分液漏斗中 加氨水5ml 加乙醇35ml

    搖勻 用乙醚抽提(每次40ml抽提三次) 收集乙醚層 10ml水洗乙醚層三次 →水層再

    30ml乙醚抽提一次 合并所用乙醚 用索氏法除乙醚→ 待瓶中乙醚除盡后 30ml80%

    KOH 40mlC2H5OH →加0.8g焦性沒食子酸 83℃水浴30分鐘(皂化脂肪)→ 冷卻后移入

    250ml分液漏斗中 60ml 40ml乙醚抽提三次 →合并乙醚抽提液 用水洗至中性

    用索氏法除乙醚 除去后用5ml石油醚溶解瓶中內容物 然后移入刻度試管中

    2)層析

    在層析柱內裝8cm高度中性氧化鋁 2cm高度堿性氧化鋁及1cm無水硫酸鈉 以石油醚浸透 裝皂化后的樣液慢慢于柱內→ 12ml石油醚洗試管 洗液倒入柱內,活塞打開以每分鐘為35滴左右的速度打開,當液面降到接近硫酸鈉時 5ml石油醚→ 隨后用5ml洗脫液逐次洗滌。

    層析柱上第一個黃色層析層,一般是β-胡蘿卜素,此帶在12%洗脫液前后洗去,收集于10ml容量瓶中直到流出物不呈黃色為止,此層可測β-胡蘿卜素用,而VA一般在50%洗脫液洗出,用2ml刻度吸管收集1ml。吸約0.2ml于小試管中→加0.3ml25%三氯化銻→溶液如呈蘭色→表明有VA存在,故0.5ml用石油醚定容10ml

    3)樣液測定

    以石油醚為空白

     

    4)計算                                             

    VA(I.μ100G)=(E×106×2)/(1830×100×W)×(1000/0.3)    

    0.3 :每0.3μg VA相當于1 I.μ

    E 消光值            W 樣品重量(g

    1830 :石油醚中其消光值1%cm1830

    I.μ): 一個國際單位,維生素A相當于0.6 μgβ-胡蘿卜素。

    4、試劑

    50%KOH;⑵ 無水硫酸鈉;⑶ 乙醚(不含過氧化氫);⑷ 石油醚;⑸ 苯;

    45%C2H5OH(應不含醛類物質)

    酒精中含醛類的檢查方法:

    首先配銀氨溶液,在50%硝酸銀溶液中加入濃氨水,直到氧化銀沉淀又重新溶解為止,在小試管中加2ml銀氨溶液,加35滴酒精,搖勻,加10%NaOH 1滴加熱,若有銀鏡反應,表示乙醇中含有醛。

    脫醛處理:

    取乙醇2000ml AgNO32g 振搖溶解 NaOH 4g →振搖溶解 過濾 上清液 蒸餾 即可

    2025% SbCl3CHCl3

    先量取100mlCHCl3于廣口瓶中,用減差法稱取一定量的干燥SbCl3SbCl3易吸水,所以必需蒸餾重結晶后使用,一般用沙浴上加熱。

    二、維生素D

    維生素D在魚肝油和雞蛋黃等食品中含量較多,一般成人不會缺VD,而嬰兒容易缺乏。

    1、操作步驟

    提取 

    樣品(奶粉)+水→混勻 在NH4OH的作用下酪蛋白Ca鹽溶解加入乙醇使脂肪球分離→乙醚、石油醚萃取得到脂質(其它樣品可用索氏提取得到脂質) 

     

    皂化

    在奶粉中脂溶性物質有VD、β-胡蘿卜素、VAVE、甾醇、脂肪。

    目前皂化有三種情況:

    低溫(室溫)

    中溫(70℃±2℃)

    高溫(10015min

    低堿

    低堿

    低堿

    回收率不完全

    回收率46%

    回收率70%

    低堿 = 脂肪︰KOH12.5的關系

    另外在皂化時加抗氧化劑與不加抗氧化劑回收率不一樣,加抗氧化劑的回收率高于不加抗氧化劑的回收率。

    有人將上面的皂化條件互補,采用中溫-高堿并加抗氧化劑,這樣的回收率為96.8%,效果較好。

    故皂化條件 70℃±2℃高堿 + 抗氧化劑

    萃取

    除甾醇

    甾醇在食品中含量較多,主要是通過柱子,這個柱子就是毛地黃皂甙。

    甾醇 + 毛地黃皂甙 沉淀

    洗脫液用乙醚︰己烷 = 15配制而成

    甾醇︰毛地黃皂甙    = 114 用量

    皂土柱層析

    VDVA共存時,須用皂土柱層析除VAVA的分解產物。

    測定方法有兩種:

    比色法:
    維生素ACHCl3 SbCl3CHCl3/乙酰氮 形成橙黃色物質 500 nm下測定

    紫外分光光度法 

    VD/乙醇 265 nm下測定 

    編輯:foodyy

     
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